ag尊龙凯时提供的大鼠成纤维样滑膜细胞（FLS）培养说明书旨在为研究人员提供详尽的细胞培养指导，以确保细胞的顺利生长和应用。

一、细胞培养条件

本细胞类型为大鼠成纤维样滑膜细胞，具有贴壁生长的特性。推荐使用无血清冻存液（货号：C7001）进行冻存。培养体系为DMEM+10%FBS+1%双抗。初始传代可采用1:2的比例，建议每2天更换培养液，以保持培养环境的稳定性。

二、细胞收到后的处理

收取细胞后，应立刻将其培养至良好状态，充满完全培养液并封好瓶口，这样可以更好地保障细胞的运输安全。在操作过程中，需使用75%酒精喷洒整个细胞瓶以进行消毒。将细胞瓶放置于37℃、5% CO2培养箱内静置3-4小时，以稳定细胞的生长状态后再进行后续处理。显微镜观察细胞生长情况，并分别在不同倍数下拍照保存（建议使用40x、100x和200x各一张），前三天的照片为重要的售后凭据。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

如细胞汇合度未超过80%，需将培养液收集至离心管中，保存约5ml，放入37℃、5% CO2孵箱培养；若细胞密度超80%，则可进行传代，具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞消化情况，直到细胞变圆并脱落后迅速加入≥5ml完全培养基以终止消化。
3. 轻轻吹打细胞，使其完全脱落后吸出悬液，转移至15ml离心管中，以1000RPM离心5分钟，弃去上清液，重悬于1-2ml完全培养基中。
4. 按1:2的比例分瓶传代（如两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2培养箱中继续培养。

b. 细胞冻存

当细胞在培养瓶中生长至覆盖80%面积时，进行以下操作：

1. 弃去培养液，用PBS清洗细胞一次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，观察至细胞回缩变圆后加入5ml完全培养液终止消化，轻轻吹打使细胞脱落，转移至15ml离心管，1000rpm离心5分钟。
3. 弃去上清，沉淀细胞，加入1mlag尊龙凯时无血清冻存液（货号：C7001）混匀后转入冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱存放，如需转入液氮罐中，则需在-80℃冰箱存放24小时以上后再进行转移。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出冻存管（注意佩戴防护装备），迅速置于37℃水浴中解冻，至冻存管中无冰晶后，使用75%酒精擦拭外壁。
2. 将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，以1000rpm离心5分钟。
3. 弃去上清，沉淀后用5ml完全培养基重悬并接种至T25培养瓶，放置于37℃、5% CO2培养箱中培养。
4. 第二天更换为新鲜的完全培养基继续培养。

四、注意事项

在运输过程中，部分细胞可能会因贴壁不牢而发生脱落，这是正常情况。如脱落现象较严重，可通过离心收集并重新处理细胞。具体步骤包括收集培养液气体至离心管，离心后收集上清进行培养，并重悬沉淀细胞后按比例进行传代。

五、售后条款

如细胞出现问题，ag尊龙凯时承诺在满足特定条件下可进行重发。包括但不限于货物在运输途中出现的问题、细胞出现污染等。对于客户操作不当或使用非推荐培养体系等情况，我们将不予重发。请务必在收到细胞后的有效时间内与我们沟通并提供相关证明，以便实时处理。