一、概念

1. 细胞系（Cell Line）

细胞系是指在原代培养成功经过首次传代后形成的细胞群，主要由原代培养物中的细胞世系构成。

2. 细胞株（Cell Strain）

细胞株是指通过选择性或克隆技术从原代培养物或细胞系中获取的具备特定性质或标志物的细胞群。这些特殊性质必须在整个培养过程中持续存在。如果细胞无法长期传代，则称为有限细胞株；若可持续传代，则称为连续细胞株。对于人类肿瘤细胞，若在体外培养超过六个月且稳定生长，则可称为连续性株或系。

二、建立细胞系或细胞株的要求

对体外培养群体的认可标准因具体情况而异，并不存在统一规定。针对原代培养的细胞，只需确保供体一致、取材部位及组织类别稳定。对于计划长期培养或重复传代的细胞，通常需要提供以下信息：

1. 组织来源

包括细胞供体所属物种（人体或动物）、个体性别、年龄以及取材的器官或组织。如果细胞来源于肿瘤组织，还需提供临床和病理诊断信息及病历号等。

2. 细胞生物学检测

应了解细胞的一般及特殊生物学特性，如细胞形态、特异结构、生长曲线、分裂指数、倍增时间及接种率等。如果是肿瘤细胞，还需要通过软琼脂培养、异体接种致瘤等实验确认其恶性特性。

3. 培养条件与方法

应明确细胞系或细胞株所适应的生存环境，包括使用的培养基、血清种类、用量及适宜的pH值。

三、细胞培养的关键要点及基本流程

（一）肿瘤细胞培养技术要点

1. 取材

样本主要来自外科手术或活检。采样时应避免使用坏死组织，选择瘤细胞集中且活力较好的部分，淋巴结或胸腹水通常是较好的培养材料。如果不能及时培养，可以考虑冻存，冻存方法同正常组织。

2. 成纤维细胞排除

肿瘤组织中常会混有成纤维细胞，这些细胞在培养中可能与瘤细胞同时生长，从而影响肿瘤细胞的生长。常用的排除方法包括机械刮除、反复贴壁、消化排除及胶原酶消化等。

3. 提高肿瘤细胞存活率与生长率

根据实验经验，肿瘤细胞在体外培养较为困难，建立可传代的肿瘤细胞系更是具挑战性。通常，细胞在适应新环境后才能生长，因此需采取一些特殊措施，如使用合适的底物（例如鼠尾胶原等）、运用细胞生长因子（如胰岛素、氢化可的松、雌激素等）以及考虑动物媒介培养。

（二）人类淋巴母细胞建立株的方法

1. 取4毫升肝素抗凝血于离心管中，加入2毫升RPMI 1640培养基。

2. 混匀后缓慢沿管壁加入到预置的4毫升淋巴细胞分离液上，静置30分钟。

3. 在1500rpm条件下离心15分钟，取出白细胞层（第二层）于新离心管中。

4. 加入5毫升RPMI 1640培养基，洗涤白细胞两次。

5. 将白细胞接种至1毫升RPMI 1640培养基中，并添加10微升环胞霉素和100微升EB病毒液，混匀。

6. 在37℃下以40次/分的速度在水浴摇床振荡3小时。

7. 离心1500rpm，15分钟，将细胞接种至1毫升含有1mM谷氨酰胺的培养基中，加入10微升环胞霉素，轻轻混匀后置于37℃培养。

8. 5天后观察细胞转化和生长情况，决定是否进行半量换液。通常半量换液1至2次，并维持环胞霉素的浓度。

9. 待转化的细胞数量显著增加并出现细胞团块后，转入25毫升细胞培养瓶中，加入1至2毫升培养基，37℃培养10至15天。同时每隔3至4天观察并决定是否更换培养基及传代。

10. 当细胞达到一定数量后进行冻存，冻存前需进行核型分析并做好记录。

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