在实验室培养细胞的过程中，许多研究人员可能遇到细胞生长不良的问题。胎牛血清（FBS）是细胞培养中至关重要的成分，因此，我们总结了一些使用胎牛血清时需要注意的提示，供大家参考，记得收藏哦！

胎牛血清的保存方法

胎牛血清通常应储存在-20℃的条件下。如果需要长期保存，建议将其存放在-80℃，要避免多次冻融。如果需要频繁解冻，建议提前分装，每次按照实际用量分装后再共同冷冻，这样使用时只需按需解冻。也可以选择购买小规格的50mL产品，以方便使用。

胎牛血清的解冻过程

解冻胎牛血清时，建议将其从低温环境中取出，放置于2-8℃的冰箱中缓慢解冻（可过夜），以使其部分溶解后再在室温下完全融化。解冻过程中，应不时摇动瓶身，以促进液体的均匀混合。采用这种方法可以有效减少沉淀的产生。避免直接将血清从低温环境放入25-37℃的条件中解冻，以防止产生絮状沉淀，并影响血清中某些成分的活性，从而影响细胞培养状态和增殖速率。

解冻后出现的沉淀物

解冻后，如果胎牛血清中出现沉淀，可能是由于纤维蛋白、脂蛋白等物质聚集而成。常见的沉淀物如纤维蛋白，其形成主要是由于血清中的纤维蛋白原在解冻后凝结。虽然沉淀本身不会直接影响细胞的生长和繁殖，但如果覆盖在细胞表面，可能会影响细胞对营养物质的吸收。因此，在使用前，将血清离心去除沉淀是必要的。

胎牛血清的过滤问题

胎牛血清在出厂前经过严格的无菌处理，通常情况下是不需要额外进行过滤的。如果考虑到沉淀问题，可以通过400-600g的离心去除沉淀，必要时在培养基中加入后再过滤，以尽可能减少对营养物质的损失。

正确消化细胞的方法

细胞长至80%密度时，便可进行消化。在消化前，先用PBS冲洗细胞2-3次，并预热配置好的胰酶（通常为0.25%浓度）。在消化过程中，轻轻摇晃培养瓶，以加速细胞的脱落。如果细胞还未呈现圆形状态，应继续放回培养箱中，直至观察到细胞变为圆形后，再加入含有胎牛血清的培养基终止消化。

替换胎牛血清品牌的操作

在使用胎牛血清时，通常加入比例为10%（与培养基如DMEM混合），部分细胞可能需要调整为5%或15%。当需要更换品牌时，直接替换容易导致细胞增殖减缓或死亡。建议采用渐进方式逐步替换，以帮助细胞适应新的环境。推荐先用原品牌的血清复苏细胞，待细胞稳定后，以25%、50%、75%逐步增加新血清的比例，最终达到100%。

显微镜下观察到的小黑点是什么？

在显微镜下，如果观察到“小黑点”，可能是细菌污染、真菌污染、细胞碎片或胎牛血清中的沉淀物。细菌污染通常伴随培养液浑浊，真菌污染则可能显示菌丝结构。细胞碎片则表现为不规则的形态，而血清沉淀则为均匀的小颗粒。如果确认是细菌或真菌污染，应丢弃受污染的细胞，彻底消毒设备。

关于灭活胎牛血清

大多数情况下，胎牛血清不需要灭活。然而在特定研究中，例如免疫学或干细胞培养时，建议使用灭活血清。加热灭活需严格控制温度和时间，以防损害血清的质量。

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