ag尊龙凯时的LS1034人结肠腺癌细胞培养指南

一、细胞培养条件

细胞名称：人结肠腺癌细胞LS1034

生长特性：贴壁生长

冻存条件：无血清冻存液

培养体系：1640培养基 + 10% FBS + 1% P/S

传代方法：首次建议比例为1:2

传代情况：每2天更换培养基

备注：使用无菌离心管收集文化基以便进行对比培养。如对比培养结果不理想，建议直接购买我们的完全培养基。

二、细胞处理及培养

收到细胞后，待其培养至健康状态后，将完全培养液灌满并封好瓶口，以此确保细胞的最佳运输状态。使用75%酒精对细胞瓶进行全面消毒，随后在超净台内进行无菌操作，将细胞瓶放入37℃、5% CO2培养箱中静置3-4小时以助于细胞状态的稳定。建议在显微镜下观察细胞生长情况，并拍摄不同倍数的照片（40x、100x、200x各一张），前三天的照片为重要售后依据，如未提供照片，默认收到状态良好。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

当细胞未超过80%融合度时，收集培养基至离心管中，保留5mL培养基并放入37℃、5% CO2孵箱中培养。若细胞密度超过80%，可进行传代，具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS对细胞进行1-2次洗涤。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2mL至培养瓶，放置于37℃培养箱中消化1-2分钟，并观察细胞情况，当细胞大部分变圆并脱落后，迅速添加5mL完全培养基以终止消化。
3. 轻轻吹打细胞使其完全脱落后，吸出悬液并转移至15mL离心管中，在1000 RPM下离心5分钟，弃去上清液，用1-2mL完全培养基重悬细胞。
4. 按1:2的比例进行分瓶传代（两个T25瓶），加入新的完全培养基约5-8mL/瓶，最后放入37℃、5% CO2细胞培养箱中继续培养。

b. 细胞冻存

1. 当细胞生长至覆盖培养瓶80%时，弃去培养液，用PBS清洗细胞一次。
2. 加入0.25%胰蛋白酶消化液约1mL至培养瓶中，观察细胞变圆后，迅速加入5mL完全培养基终止消化，并轻轻吹打细胞使之脱落，悬液转移至15mL离心管中，1000 RPM离心5分钟。
3. 弃去上清液，加入1mL的ag尊龙凯时无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转移至冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱中，若后续需转入液氮罐，请先在-80℃冰箱中保存24小时以上。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出冻存管（请佩戴防护面具），快速放入37℃水浴中解冻，直至管内无结晶，之后用75%酒精擦拭外壁。
2. 将冻存管中的细胞转移至含5mL完全培养基的15mL离心管中，1000 RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，重悬细胞于5mL完全培养基后，接种至T25培养瓶，放于37℃、5% CO2培养箱中养护。
4. 第二天更换为新鲜的完全培养基继续培养。

四、注意事项

部分细胞粘附性较弱，运输过程中可能会出现细胞脱落现象，这是正常的。如果脱落较多，请将所有培养液收集至离心管中，1000 RPM离心5分钟后收集上清进行过渡培养。对此细胞进行处理后，遵循上述传代步骤进行操作。

五、售后条款

1）可重发的情况

1. 若细胞在运输过程中出现丢失、瓶身破损或严重漏液，均可重发。
2. 如细胞受到污染，请在48小时内提供真实的实验结果，经核实后可重发。
3. 常温运输的细胞静置24小时后，若未存活且提供真实的细胞状态照片，可申请重发。
4. 冻结细胞在复苏24小时后如出现污染，能提供有效证据者可重发。
5. 如细胞活性不足，请在7天内提供真实实验结果，经过台盼蓝染色法确认活力后，将予以重发。
6. 在收到细胞当天及2、3天内拍照，如不告知则视为合格；如在4-7天内出现问题，需提供前3天的照片和操作步骤，技术人员会进行核定。

2）不予重发的情况

1. 因客户原因造成的细胞污染不予重发。
2. 不当操作导致细胞状态不良，亦不予重发。
3. 使用非推荐的培养体系导致的状态不良，将不予重发。
4. 若未提供培养前3天的照片，状态不良不予重发。
5. 其他未经授权处理的细胞，将不予重发。
6. 若在收到2天内未告知情况，亦不予重发。
7. 具体情况根据实际情况评估。

如需更多信息，请咨询ag尊龙凯时。